對于PCR實驗室的員工而言，在進入、使用與離開實驗室時都要遵守相關的操作規范。既然如此，要遵守哪些操作規范呢?下面，就為大家介紹PCR實驗室的員工操作規范。

PCR實驗室的員工操作規范員工在進入、使用與離開PCR實驗室時要遵守以下5條操作規范：

規范1：員工進入PCR實驗室前要先進入緩沖間，在工作服外加穿罩衣，戴好口罩、帽子和兩層手套，穿好鞋。進入緩沖區后要隨手關上外門，需要時打開照明按鈕。

規范2：員工在緩沖間內首先要打開緩沖間內的空調，再打開生物安全柜的按鈕，把實驗所需物品放入生物安全柜中，并且等待10分鐘后方能進入實驗室。

規范3：員工進入PCR實驗室后要先去工作區，打開照明按鈕與前玻璃門，把實驗所需物品放入實驗臺內，并且做好清潔物品與污染物品的區分。觀察負壓表指示數值，若數值不在預定范圍內要進行負壓調節。觀察溫濕度計，并填寫溫濕度計使用記錄。

規范4：員工進行實驗項目前必須把手臂放入生物安全柜內，待1分鐘后才能開始操作。實驗結束后要對實驗物品進行分類處理，并對工作臺面進行消毒。

規范5：工作人員在對實驗物品進行分類處理的同時還要打開排風，待風10分鐘后放下前玻璃門，打開生物安全柜紫外線燈進行消毒。離開實驗室前脫去第二層手套，填寫儀器使用記錄后才能離開。

PCR技術的問世使病原體檢測能夠快速、方便地進行。由于PCR技術假陽性率太高，只要有微量病原體存在就可得到陽性結果，這并不能作為診斷依據，只有當一定數量的病原體存在時才有臨床意義。因此，對模板準確定量顯得特別重要，應用熒光技術PCR就能夠快速、準確地得到結果。對于解決學檢測的“窗口期”問題，判斷疾病是否處于隱性或亞臨床狀態，以及檢測不能判定是現癥還是既往時，均可利用PCR進行確定。

示例：新型冠狀病毒核酸檢測。

方法學：熒光PCR法。

用途：用于體外定性檢測新型冠狀病毒的疑似病例、疑似聚集例患者、其他需要進行新型冠狀病毒診斷或鑒別。

檢測基因：新型冠狀病毒（2019-nCoV）ORFlab和N基因、E基因。

標本類型：上呼吸道標本：咽拭子、鼻拭子；下呼吸道標本：呼吸道抽取物、肺泡灌洗液樣本、肺組織活檢標本。

檢測流程：

（1）核酸檢測前的生物安全防護（工作人員個人三級防護的穿戴）→（2）樣本的滅活（56℃滅活30分鐘）→（3）樣本的核酸提取（手工、核酸提取儀）→（4）PCR體系的配制和模板加樣→（5）上機檢測及結果分析→（6）檢測后的消毒。

其他病原體檢測：HIV、甲乙丙肝、HPV、肺支、肺衣、EB病毒、腺病毒、胞病毒、甲乙流、埃博拉病毒、B族鏈球菌。

適合開展的醫院和：兒童醫院、婦幼、兒檢所、第三方、各種級別的有需求的醫院。

（1）滲漏密閉性：將n個PCR管加入半量墨汁，蓋好蓋子后放入水中，浸泡30min，沒有墨汁滲出為合格。

（2）離心密閉性：將n個PCR管加入半量純水，放入離心機，1000 rpm，30min，管蓋未崩開未漏液為合格。

（3）熱密閉性：將n個PCR管加入半量純水，蓋好蓋子稱重后放入PCR儀，設置一個常用的PCR程序，程序運行完畢后，再進行稱重，PCR管未變形，管蓋未崩開未漏液，前后重量未變化為合格。

（4）冷密閉性：將n個PCR管加入半量純水，放入-20℃冰箱，24h，離心管未變形，管蓋未崩開未漏液為合格。

（5）污染物質檢：將n個PCR管加入半量陰性純水，蓋好蓋子渦旋1 min后靜置5min，作為模板進行擴增，qPCR無擴增為合格。

（6）抑制物質檢：將n個PCR管分別加入弱陽性質控物,室溫靜置5min，然后進行提取;RNA核酸，DNA核酸，室溫靜置5min，作為模板進行擴增，qPCR擴增未被抑制為合格。

（7）空白熒光通透性：對于qPCR,需要考察PCR管是否有非特異性熒光信號，將n個空PCR管，蓋好蓋子后放入PCR儀，設置一個常用的PCR程序，程序運行完畢后，qPCR無擴增為合格。

（8）陽性熒光通透性：對于qPCR,還需要考察PCR管是否會抑制熒光的通透性，將n個含弱陽性樣品和擴增試劑的PCR管，與確認無熒光干擾的PCR管，蓋好蓋子后放入PCR儀一同擴增，設置一個常用的PCR程序，程序運行完畢后，qPCR擴增未被抑制為合格。